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  • 产品名称:Drosophila+S2

  • 产品型号:
  • 产品厂商:佰晔生物
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简单介绍:
Drosophila+S2
详情介绍:

果蝇胚胎细胞昆虫细胞产品基本信息

细胞名称: S2 (Schneider 2), Drosophila S2 Cells
Drosophila S2细胞,S2细胞,S2果蝇胚胎细胞, S2果蝇细胞,S2昆虫细胞
出品公司: Thermofisher
产品货号: R69007,R690-07
种属来源: 果蝇
组织来源: 胚胎
细胞形态: 上皮细胞样
生长特性: 悬浮贴壁混合生长
培养基:

Schneider's  Drosophila medium +10% 热灭活胎牛血清

注意使用条件培养基(用过的培养基),一般可以加入45%的条件培养基在配制的培养基里面。因为条件培养基中含有生长因子,有助于S2果蝇细胞生长。

生长条件: 温度:26-28度
气相:空气,不需要二氧化碳。
传代方法: 1:2至1:6,每周2次。
冻存条件: 45% 用过的完全培养基(条件培养基)+45% 新鲜完全培养基+10% DMSO,液氮储存

用过的完全培养基(条件培养基)中含有S2果蝇细胞的生长因子,有助于S2细胞的生长。
支原体检测: 阴性
应用: 该细胞可以作为转染宿主细胞。
细胞鉴定:
**组化显示波形蛋白(Vimentin)抗体阴性;结蛋白(Desmin)抗体阳性。
细胞说明:

1、细胞培养条件是26°C–28°C,空气中即可,不用二氧化碳。在培养皿中是半贴壁细胞,在摇瓶中是悬浮细胞。

2、S2果蝇细胞的完全培养基是:
      Schneider's  Drosophila medium + 10% 热灭活胎牛血清+ 0.1% Pluronic F-68. 这个完全细胞培养基在瞬时表达和稳表达细胞系构建的时候,都可以使用。
      Pluronic F-68在悬浮培养的时候需要加入,但是在贴壁培养的时候不用添加。
      可以选择性的加入终浓度为50 单位/ml的青霉素和50 ug/ml的链霉素。
      细胞转染和冻存的时候,需要确保细胞的活力大于95%.

3、S2果蝇细胞培养时倍增的时间是24小时,细胞进行传代的时候*好是在细胞对数生长期。

4、S2果蝇胚胎细胞的冻存条件是: 45% 用过的完全培养基(条件培养基)+45% 新鲜完全培养基+10% DMSO,液氮储存。 用过的完全培养基(条件培养基)中含有S2果蝇细胞的生长因子,有助于S2细胞的生长,所以一定要保留一点用过的培养基在里面。

5、培养S2细胞的时候,如果使用未灭活的胎牛血清,会抑制S2细胞的生长。

6、果蝇Schneider 2(s2)细胞可以转染表达载体用于蛋白瞬时表达或共转染一个筛选载体(例如pcohygro或pcoblast)构建稳表达细胞系。我们建议你测试一下你的蛋白的瞬时表达情况,然后再构建稳表达细胞系。一旦你证明你的蛋白质在s2细胞中表达,你可以构建稳表达细胞株,增加蛋白表达,扩大蛋白表达的生产规模。果蝇S2稳表达细胞系通常包含多拷贝基因插入,形成500多个-1000个拷贝数,首尾相接,插入的基因拷贝数可以通过改变表达质粒和选择质粒的比例来控制。我们建议使用表达质粒与选择质粒比例是的19:1(w/w)。你可以改变比率以优化特定基因的表达。质粒转染建议使用磷酸钙,但一些脂基转染试剂,例如Lipo2000转染试剂同样适用。

7、果蝇表达系统的筛选载体是pCoHygro载体和pCoBlast载体,他们分别含有潮霉素(Hygromycin)和杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选抗性。在这两个载体中,抗性基因都是在Copia启动子的作用下调控的。

8、构建稳表达细胞系时,使用pCoHygro筛选质粒和表达质粒一起共转染S2果蝇细胞的时候,潮霉素的筛选浓度是300ug/ml, 一般要筛选3-4个星期。使用使用pCoBlast筛选质粒和表达质粒一起共转染S2果蝇细胞构建稳表达细胞系的时候,杀稻瘟菌素的筛选浓度是25 ug/ml, 一般要筛选2个星期就可以了。在筛选过程中,细胞死亡会经常发生。      


Gibco果蝇s2细胞用于果蝇表达系统(DrosophilaM Expression System, DES)中异源蛋白的表达。S2细胞系来源于黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)胚胎后期细胞(20-24小时)的原代培养。s2细胞系的许多特征表明它来源于巨噬细胞样细胞系。s2细胞在室温下二氧化碳浓度条件下就可以生长,在培养皿中呈松散的半粘附单层,在摇瓶中呈悬浮细胞状态。

果蝇S2细胞特征如下:
 
•可以用于蛋白质的瞬时表达或用于构建稳定表达的细胞系。
 
•用于蛋白表达的质量和性能测试,用于质控。
 
 
1、用于蛋白质的瞬时表达或构建稳表达细胞系
 
果蝇s2细胞可单独用重组表达载体进行瞬时表达研究,或使用载体(如pcohygro或pcoblast)以构建稳表达细胞系。有多种果蝇表达系统试剂盒可用于在S2细胞中表达感兴趣的重组蛋白。
 
2、细胞株质控标准
 
每批S2细胞都经过冷冻后细胞生长和活力测试。此外,还对S2细胞株进行了**、酵母菌、支原体和病毒污染检测,并对其进行了同工酶和核型分析。
 
 
S2细胞图片:



 


S2果蝇胚胎细胞接受后处理

1)  收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
 
2)  请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
 
3)  弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。
 
4)  如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
 
5)  接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
 

S2果蝇胚胎细胞培养操作

1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
 
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
 
     1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
 
     2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消 化。
     
     3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
 
     4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
 
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
 
      1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
 
      2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻存管做好标识。
 
     3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储 存。记录冻存管位置以便下次拿取。

S2果蝇胚胎细胞培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现 象发生请及时和我们联系。
 
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题,责任由客户自行承担。
 
3.   用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常, 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下 照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。
 
4.   静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细 胞汇合度  80%左右时正常传代。
 
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞 传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。
 
6.   建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和 Procell 技术 部沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联 系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
 
7. 该细胞仅供科研使用。



果蝇胚胎细胞昆虫细胞产品说明书pdf版和相关资料下载

果蝇胚胎细胞昆虫细胞产品应用举例

  • pCMV-DsRed-Express2

    2015-08-16
  • pEF1α-IRES-DsRed-Express2

    2015-07-31
  • pEF1α-DsRed-Express2

    2015-07-30
  • pDsRed-Express2-N1

    2015-07-30
  • pDsRed-Express2-C1

    2015-07-30
  • pIRES2-ZsGreen1

    2015-07-30
  • pIRES2-DsRed2

    2015-01-12
  • pIRES2-AcGFP1

    2015-07-26
  • pIRES2-DsRed-Express2

    2015-07-26
  • plRES2-ZsGreen1

    2015-01-22
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