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  • 产品名称:293FT

  • 产品型号:
  • 产品厂商:佰晔生物
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简单介绍:
293FT
详情介绍:

HEK293-FT慢病毒包装细胞产品基本信息

细胞名称: 293FT细胞, 293FT慢病毒包装细胞,  HEK293-FT细胞,HEK-293FT细胞,表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞
出品公司: Thermofisher
目录号: R700-07
种属来源:
组织来源: 胚肾
疾病特征: 正常
细胞形态: 圆形
生长特性: 贴壁生长
应用: 293FT细胞主要用于慢病毒包装,是目前使用*广泛和效果*好的慢病毒包装细胞。
培养基:       293FT细胞的1L完整培养基配方如下:
       DMEM培养基                                                                          900 ml 
       胎牛血清                                                                                 100 ml 
       10mM MEM-NEAA(Non-Essential Amino Acids, 100X)           10  ml
       200mM L-Glutamine(100x)                                                10 ml
      100mM  MEM丙酮酸钠(100X)                                                     10 ml
      青链霉素双抗 (100x)                                                           10 ml
      50 mg/ml遗传霉素G418(100x)                                           10 ml 
    
      配置好的完全培养基*好现配现用,没有用完的可以放置在4度冰箱中,保存时间可以达到半年!              
生长条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5-10%; 温度:37 ℃, 
传代方法: 1:2至1:6,每周2次。
冻存条件: 90% 完全培养基+10% DMSO,液氮储存
支原体检测: 阴性
产品说明:
1、 293FT细胞主要用于慢病毒包装系统,是目前*好的慢病毒包装细胞株。

2、 293FT细胞来源于293F细胞,稳表达SV40 large T抗原。细胞中SV40 large T抗原表达启动子是CMV启动子,蛋白表达水平较高而且持续稳定。这使得293FT细胞成为非常适合于慢病毒包装的宿主细胞。

3、 293FT细胞具有新霉素抗性,该抗性来自细胞中含有的SV40 large T稳表达质粒(pCMVSPORT6TAg.neo)。该新霉素基因位于SV40启动子的控制下,因此,在传代293FT细胞的时候,需要使用遗传霉素(也叫新霉素或者G418,工作浓度为500 ug/ml)进行抗性筛选传代。

4、 293FT慢病毒包装细胞的完全培养基中,需要包含500ug/ml的遗传霉素,用于细胞的筛选维持。 遗传霉素(G418)的储存浓度是50 mg/ml, 是工作浓度的100倍。

5、 慢病毒包装质粒转染的时候,需要保证细胞已经复苏24-48小时,同时需要保证293FT细胞的活力大于90% 。

6、 293FT细胞是贴壁细胞,传代的时候,需要进行胰酶消化。

7、DMEM培养基中本身就含有4 mM的L-Glutamine,但是因为L-Glutamine会随着时间降解,所以在完全培养基中,建议补加2 mM的谷氨酰胺。6 mM浓度的谷氨酰胺,能够更好维持293FT细胞的生长,更好的包装慢病毒。

8、293FT细胞的1L完整培养基配方如下:
       DMEM培养基                                                                          900 ml 
       胎牛血清                                                                                 100 ml 
       10mM MEM-NEAA(Non-Essential Amino Acids, 100X)           10  ml
       200mM L-Glutamine(100x)                                                10 ml
      100mM  MEM丙酮酸钠(100X)                                                     10 ml
      青链霉素双抗 (100x)                                                           10 ml
      50 mg/ml遗传霉素G418(100x)                                           10 ml 
   
      配置好的完全培养基*好现配现用,没有用完的可以放置在4度冰箱中,保存时间可以达到半年!              

293FT表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞接受后处理

1) 收到细胞后,请检查是否漏液 ,如果漏液,请拍照片发给我们。

 2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

 3) 弃去T25瓶中的培养基,添加 6ml本公司附带的完全培养基。

 4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

 5) 接到细胞次日,请检查细胞是 否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
 

293FT表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞培养操作

1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。

 2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。      
   
     1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。

     4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

 3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;

    1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

    2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。

    3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

293FT表达SV40T抗原人胚肾上皮细胞培养注意事项

 1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现 象发生请及 时和我们联系。
 
 2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题,责任由客户自行承担。

 3.   用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常, 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活 力,请拍下 照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。

 4.   静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细 胞汇 合度  80%左右时正常传代。

 5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。

 6.   建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和 Procell 技术 部 沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联 系,告知细胞的具体情况,以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。

 7.该细胞仅供科研使用。


HEK293-FT慢病毒包装细胞产品说明书pdf版和相关资料下载

HEK293-FT慢病毒包装细胞产品应用举例

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